Izolacja DNA z owoców

Data dodania: 07.10.2018 Autor: Wioletta Bodecka

 

Materiały, odczynniki, sprzęt:
- materiał biologiczny (banan, kiwi, truskawka)
- płyn do mycia naczyń
- zmrożony alkohol izopropylowy lub etanol, lub denaturat
- małe woreczki strunowe
- ręczniki papierowe
- chlorek sodu
- wrząca woda
- zestaw do sączenia (np. kubek i gaziki, ręcznik papierowy)

Kolejne cele i sposób realizacji
1. Zniszczenie ścian komórkowych i ujednolicenie (homogenizacja) banana lub innego owocu
W tym celu dokładnie zmiażdż owoc (np. w woreczku strunowym) na gładką masę.
2. Rozpad błon komórkowych i jądrowych, dalszy rozpad komórek. Przygotuj bufor ekstrakcyjny. Wymieszajcie w naczyniu wodę (ok. 50 ml), płyn do naczyń (1 łyżeczkę) i sól (1 łyżeczkę). Połącz bufor z masą owocową w woreczku strunowym, wymieszaj.
3. Inaktywacja enzymów, które mogą rozkładać materiał genetyczny. DNAzy to enzymy wrażliwe na ciepło. Wstaw mieszaninę z woreczkiem strunowym do kąpieli wodnej na 3-5 minut, docelowa temperatura, którą powinna ona osiągnąć to ok 60°C.
4. Oddzielenie roztworu zawierającego DNA od zanieczyszczeń. Przefiltruj mieszaninę przez sączek laboratoryjny, filtr do kawy albo zwykły ręcznik kuchenny, lub gazik. Postaraj się nie spienić płynu. Można sączyć do docelowego naczynia, w którym będzie prowadzona ekstrakcja: probówki, plastikowego kieliszka, małej ale wysokiej zlewki. Przesączu nie musi być dużo - wystarczy warstwa wysokości ok. 1,5- 2 cm.
5. Rozpuszczenie wyekstrahowanego DNA w alkoholu izopropylowym lub etanolu. Bardzo ostrożnie dolej warstwę zmrożonego alkoholu izopropylowego lub etanolu: tak, aby powstała wyraźna granica między fazami. Obserwuj zachodzące zjawisko. DNA będzie powoli wytrącało się do warstwy utworzonej przez alkohol. Po kilku minutach będziesz mógł je bez problemu wyciągnąć (gęste, galaretowate).

DODAJ INSPIRACJĘ

Masz ciekawy pomysł na inspirację dla innych odkrywców? Uzupełnij formularz i prześlij go do nas.

DODAJ INSPIRACJĘ